今天讓我們來了解一下重組蛋白的獲取途徑及表達(dá)系統(tǒng)分別是什么吧。
 

　　重組蛋白的產(chǎn)生是應(yīng)用了重組DNA或重組RNA的技術(shù)從而獲得的蛋白質(zhì)。體外的生產(chǎn)主要包括四大系統(tǒng):原核蛋白表達(dá)，哺乳動(dòng)物細(xì)胞蛋白表達(dá)，酵母蛋白表達(dá)及昆蟲細(xì)胞蛋白表達(dá)。
 

　　獲得途徑：
 

　　重組蛋白需要使用表達(dá)系統(tǒng)來對其進(jìn)行制備，其獲得途徑可以分為體外方法和體內(nèi)方法。兩種方法的前提都是應(yīng)用基因重組技術(shù)，獲得連接有可以翻譯成目的蛋白的基因片段的重組載體，之后將其轉(zhuǎn)入可以表達(dá)目的蛋白的宿主細(xì)胞從而表達(dá)特定的重組蛋白分子。
 

　　體外重組蛋白的生產(chǎn)主要包括四大系統(tǒng)：原核蛋白表達(dá)(常用的大腸桿菌蛋白表達(dá))，哺乳動(dòng)物細(xì)胞蛋白表達(dá)(常用的細(xì)胞CHO，HEK293)，真核表達(dá)系統(tǒng)(酵母)及昆蟲細(xì)胞蛋白表達(dá)。合適表達(dá)系統(tǒng)的選擇取決于重組蛋白的特性、預(yù)期應(yīng)用以及該系統(tǒng)能否生產(chǎn)足夠量的蛋白質(zhì)，根據(jù)自身的下游運(yùn)用選擇合適的蛋白表達(dá)系統(tǒng)，提高表達(dá)成功率。
 

　　表達(dá)系統(tǒng)：
 

　　(1)目前應(yīng)用廣泛的表達(dá)系統(tǒng)有三大類，大腸桿菌(Esherichia coli)表達(dá)系統(tǒng)、酵母表達(dá)系統(tǒng)、CHO細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)。其中，大腸桿菌是表達(dá)重組蛋白常用的宿主菌，已應(yīng)用于許多具有重要藥用價(jià)值蛋白的生產(chǎn)。
 

　　大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)具有許多優(yōu)點(diǎn)，如生長快、培養(yǎng)成本低廉、遺傳背景清楚和易實(shí)現(xiàn)高密度培養(yǎng)等。大腸桿菌DH5α是一種誘變菌株，主要表現(xiàn)對外源DNA的免疫缺乏。大腸桿菌DH5α是基因工程常用的宿主菌之一，相比于正常菌種缺少了一定的免疫機(jī)制。
 

　　(2)不同的表達(dá)系統(tǒng)和培養(yǎng)方法顯著影響下游的處理過程，目標(biāo)蛋白表達(dá)是否形成包涵體，目標(biāo)蛋白表達(dá)的定位(胞內(nèi)、細(xì)胞膜內(nèi)、周質(zhì)空間和胞外)，蛋白表達(dá)的量都依賴于所選擇的的表達(dá)系統(tǒng)。