產(chǎn)品介紹：

　DNA無縫克隆技術(shù)是一項(xiàng)簡(jiǎn)單、高效、快速將插入片段定向克隆至任意載體的任意位點(diǎn)的方法，本產(chǎn)品不依賴于T4連接酶，不受載體和目的片段酶切位點(diǎn)的限制，而直接使用同源重組的方法，采用特殊的酶將任意方法線性化后的載體與線性化載體兩端具有20-25 bp重疊區(qū)域的PCR片段定向重組，50℃反應(yīng)5-15分鐘即可快速實(shí)現(xiàn)1-5個(gè)片段的定向無縫隆。

產(chǎn)品名稱：康為世紀(jì) 快速DNA無縫克隆預(yù)混試劑

產(chǎn)品貨號(hào)：CW3034M

產(chǎn)品相關(guān)原理：

產(chǎn)品組分：

額外試劑需求：

1.插入片段，特異引物，線性化載體

2.高保真PCR試劑

3.感受態(tài)細(xì)胞

4.膠回收試劑盒

5.PCR儀，PCR反應(yīng)管等。

使用前準(zhǔn)備:

插入片段的制備與回收

插入片段的制備可用任意PCR酶擴(kuò)增，克隆過程不受擴(kuò)增產(chǎn)物平末端或粘末端（A尾）的影響（重組過程中將被去除，在最終克隆產(chǎn)物中不會(huì)出現(xiàn)），但為了減少擴(kuò)增突變，特別是點(diǎn)突變實(shí)驗(yàn)中，建議使用高保真聚合酶（CW2965 Super Pfx Master Mix）進(jìn)行擴(kuò)增。

一般情況下，PCR產(chǎn)物推薦膠回收純化以降低背景比例，如果插入片段來源于質(zhì)粒模板，且該質(zhì)粒與重組載體具有相同抗性，需用內(nèi)切酶Dpn I消化PCR產(chǎn)物，以降低背景，提高陽性率。

相關(guān)使用說明：

1.重組產(chǎn)物轉(zhuǎn)化

克隆感受態(tài)置于冰上解凍，取10ul反應(yīng)產(chǎn)物加入100 ul感受態(tài)細(xì)胞中，輕彈管壁混勻，冰上靜置30分鐘。

42℃水浴熱激90秒，立即置于冰上2-3分鐘。

加入600 ul無抗LB液體培養(yǎng)基，37℃搖床220 rpm培養(yǎng)30分鐘。

5000 rpm離心5分鐘，棄多余培養(yǎng)液，剩余100 ul菌液重懸菌體，用無菌涂布棒

均勻涂布在正確抗性的平板上。

37℃培養(yǎng)箱倒置培養(yǎng)12-16小時(shí)。

2.陽性克隆的鑒定

可根據(jù)具體情況，選擇菌落PCR鑒定、提取質(zhì)粒進(jìn)行限制性內(nèi)切酶鑒定或測(cè)序鑒定。

保存條件：-20℃，保質(zhì)期一年。

產(chǎn)品訂購(gòu)信息：

品牌             貨號(hào)                   名稱                                                     規(guī)格

康為世紀(jì)  CW2020M  HiFiScript gDNA Removal RT MasterMix   100 rxns

產(chǎn)品名稱：康為世紀(jì) 快速DNA無縫克隆預(yù)混試劑

產(chǎn)品貨號(hào)：CW3034M

關(guān)于公司：

康為世紀(jì)是主要從事高附加值、高技術(shù)含量的生物試劑的研發(fā)與生產(chǎn)，為生命科學(xué)研究、基因檢測(cè)和體外診斷用戶提供創(chuàng)新型生物產(chǎn)品和服務(wù)。康為世紀(jì)建立了專業(yè)化、集約化、能夠形成自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的技術(shù)創(chuàng)新體系和開放式的合作創(chuàng)新平臺(tái)，構(gòu)建成了公司完整的研發(fā)創(chuàng)新體系。

紅榮微再——助力分子診斷新未來

紅榮微再作為RNA、NGS、ctDNA、qPCR的分子診斷專業(yè)供應(yīng)商，以“傳遞科學(xué)價(jià)值，服務(wù)科學(xué)研究"為宗旨,努力為客戶提供質(zhì)量可靠、貨美價(jià)優(yōu)的分子診斷試劑耗材，與客戶攜手為中國(guó)分子診斷的發(fā)展而前行。