①加胎牛血清培養(yǎng)基：  

動物細(xì)胞離體培養(yǎng)常常需要血清。各種細(xì)胞合成培養(yǎng)基（如MEM、RPMll640、DMEM）只提供細(xì)胞生長所需的各種基礎(chǔ)營養(yǎng)物質(zhì)，包括碳水化合物、氨基酸、無機鹽、維生素等。血清提供生長必需因子，如激素、微量元素、礦物質(zhì)和脂肪。根據(jù)不同細(xì)胞的需求，一般含有10%～20%的血清培養(yǎng)基即可維持細(xì)胞較快的生長增殖速度。  

②無菌環(huán)境：  

無毒和無菌是體外培養(yǎng)細(xì)胞的首要條件。使用的各種試劑和耗材要經(jīng)過高壓或紫外線滅菌。嚴(yán)格的無菌操作是養(yǎng)好細(xì)胞的必要前提。為防止細(xì)胞受到微生物感染，可在培養(yǎng)基中加入雙抗。  

③溫度和氣體環(huán)境：  

一般動物細(xì)胞在體外培養(yǎng)的適宜溫度是37℃，不適宜的環(huán)境溫度會影響細(xì)胞的生長甚至死亡。二氧化碳和氧氣的比例要在細(xì)胞培養(yǎng)過程中不斷進(jìn)行調(diào)節(jié)，一般維持在5%。二氧化碳既是細(xì)胞的代謝產(chǎn)物，又與維持培養(yǎng)液的pH密切相關(guān)。  

如何防控污染：保持良好的操作習(xí)慣，超凈臺要紫外滅菌30min，以70%的乙醇擦拭無菌操作臺，開啟超凈臺風(fēng)扇運轉(zhuǎn)數(shù)分鐘后，才開始實驗。  

每次只處理一種細(xì)胞，以免失誤混淆或細(xì)胞間污染，操作不要觸碰吸管尖頭部或容器口等。  

像對待孩子一樣養(yǎng)細(xì)胞，它很脆弱，最好每天關(guān)注一下，以免出現(xiàn)培養(yǎng)箱缺二氧化碳，停電、溫度不夠等現(xiàn)象。  

避免全軍覆沒，好細(xì)胞要及時保存，有備用的細(xì)胞，這樣即使有細(xì)胞污染還可以有備用的細(xì)胞頂上，不至于太惱火，好習(xí)慣要保持。  

不同細(xì)胞喜好不同，需要在培養(yǎng)中慢慢體會，例如平滑肌細(xì)胞比較好長，2-3天可能就會有很多細(xì)胞，應(yīng)該算是比較好養(yǎng)活的；內(nèi)皮細(xì)胞分泌物較多，需要時不時換洗才會長的好等等。